Die Linie 1 beginnt in der Konradsiedlung in der Pommernstraße in nördlicher Richtung und fährt weiter über Berliner Straße, Mecklenburger Straße, Ostpreußenstraße in südlicher Richtung, Aussiger Straße, Sandgasse, Brandlberger Straße in westlicher Richtung, Sudetendeutsche Straße und Isarstraße zur Kreuzung Isar-/Nordgau-/Brennesstraße beim ALEX-Center mit den Haltestellen Isarstraße, Nordgaustraße und Hans-Hayder-Straße (stadtauswärts).  Dies ist die einzige Kreuzung mit verschiedenen Haltestellennamen in Regensburg, weshalb die Umsteigebeziehungen eher versteckt sind. 

Weiter geht’s nach Süden über die Nordgaustraße vorbei am Milchwerk bei der Haltestelle Donaustaufer Straße, am Donau-Einkaufszentrum bei der Haltestelle Weichs, Nibelungenbrücke und Weißenburgstraße und wieder nach Westen über die Greflingestraße zum Stobäusplatz. Diese Haltestelle weist als Besonderheit auf, dass der Bus stadteinwärts durch eine Fußgängerinsel getrennt links der Fahrspuren hält, dies erleichtert den Umstieg in die Linien nach Südosten, z.B. 2A, 2B, 77, 9.

Der Bus fährt nun über die Landshuter Straße, den Ernst-Reuter-Platz und die Maximilianstraße zur zentralen Umsteigehaltestelle „Albertstraße“. 

Im weiteren Streckenverlauf wird die Altstadt nördlich bis zum Arnulfsplatz umfahren, nämlich auf der Trasse D.-Martin-Luther-, Thundorfer-, Keplerstraße und Weißgerbergraben. Am Arnulfsplatz besteht insbesondere Anschluss aus dem Südwesten mit den Lnien 2A und 2B. Außerdem sind von hier aus die Theater und ein Kino gut zu erreihen: Stadttheater, Velodrom, Statt-Theater, Garbo. Lediglich das Thon-Dittmar-Palais ist vom Fischmarkt aus noch etwas schneller zu erreichen.

Über die Neuhausstraße und die Jakobsstraße verläßt die Linie die Altstadt und fährt über Prüfeninger Straße, Rennweg, Killermannstraße und Roter Brach-Weg zur Endhaltestelle Prüfening.
Dieses Teilstück hat ein enormes Fahrgastaufkommen, weil hier unter anderem das EON-Verwaltungsgebäude am Stadtparkrand an der Haltestelle Taxisstraße, die Hedwigsklinik und das Goethegymnasium an der Haltestelle Schiller-/Goethestraße, das Jahnstadion und alte FH-Gebäude an der Haltestelle Lessingstraße, das Krankenhaus der Barmherzigen Brüder an der Haltestelle Margaretenau, die kaufmännische Berufsschule an der Haltestelle Lilienthalstraße mit Umsteigemöglchkeit zur Linie 4 und der Bahnhof Prüfening und ein Einkaufszentrum an der Haltestelle Rennplatz stehen.

Auf dem Rückweg ist die Trasse etwas kürzer. Von der Haltestelle Prüfening aus verkehrt die Linie direkt über den Rennweg, zwischen Ernst-Reuter-Platz und Stobäusplatz gemäß der Einbahnregelung über die Luitpold- statt Landshuter Straße und von der Aussiger Straße schon über die Dolomitenstraße zur Pommernstraße.

Die Linie 1 ist die Buslinie mit dem dichtesten Takt. Montag bis Freitag gibt es einen 10-Minuten-Grundtakt, der in den Sommerferien auf einen 15-Minuten-Takt gestreckt wird. Samstags verkehrt die Linie morgens und abends im 20-Minuten-Takt, dazwischen im 15-Minuten-Takt, sonntags und im Spätverkehr im 30-Minnuten-Takt. Sie ist die einzige Linie, die an beiden Endpunkten eine Schleife durchfährt.

Zwischen Thundorfer- und Lilienthalstraße verkehrt auch die Linie 4.
Verstärkerfahrten zwischen Albertstraße und Stadtwesten werden durch die Linie 1A bedarfsgerecht durchgeführt.  Zwischen dem Hauptbahnhof und der Pommernstraße gibt es vereinzelte Fahrten  der Linie 77.

Die Linie 1 wird ausschließlich von den Regensburger Verkehrsbetrieben (RVB) befahren. Zum Einsatz gelangen fast ausschließlich Gelenkbusse, lediglich nach 20 Uhr oder vor 13 Uhr an Sonn- und Feiertagen verkehren auch Solobusse der RVB auf der Omnibuslinie 1.